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ELISA試劑盒出現(xiàn)問(wèn)題有關(guān)知識(shí)
發(fā)布時(shí)間： 2016-10-31 點(diǎn)擊次數(shù)： 2150次1、問(wèn)：做直接ELISA試劑盒法檢驗(yàn)小鼠血清中的IgE抗體，設(shè)空白對(duì)照、和陰性對(duì)照、陽(yáng)性血清稀釋倍數(shù)為5千、1萬(wàn)、10萬(wàn)、20萬(wàn)不等，用的是生物素符號(hào)的羊抗鼠IgE抗體，和親和素的辣根過(guò)氧化物酶。但是效果除了空白對(duì)照孔沒(méi)有顏色外，別的各孔全有顏色，并且OD值都相差不大，為何?
答復(fù)：也許因素如下：
(1) 水質(zhì)被金屬離子等污染;防止辦法盡量運(yùn)用新鮮水或蒸餾水。
(2) 洗刷不充沛，樣品中其它成分殘留或酶殘留;防止辦法洗刷液應(yīng)注滿(mǎn)微孔，充沛洗刷。
(3) 移液頭重復(fù)運(yùn)用，未洗凈或消毒不*; 防止辦法移液頭一次性運(yùn)用。
(4) 酶標(biāo)板靈敏度過(guò)高。
(5) 一抗顯色時(shí)間的控制等等，對(duì)于ELISA的每一步都要留心才行。
2、ELISA試劑盒加樣時(shí)的防錯(cuò)小經(jīng)驗(yàn)
(1)用一張寫(xiě)滿(mǎn)字的紙，字越多越好，比如報(bào)紙，墊在下面，這么，加過(guò)標(biāo)本的小孔看過(guò)去下面的字會(huì)變小，沒(méi)加的字正常，非常簡(jiǎn)略差異。
(2)可以運(yùn)用液面反光與沒(méi)有加的孔加以差異
(3)在標(biāo)本加完后，再把加樣槍全壓下，使液面發(fā)作小氣泡，也可以加以差異
3、棋盤(pán)ELISA試劑盒試驗(yàn)的操作辦法:
(1)將抗原按一定的梯度倍比稀釋后，按照ELISA從上到下(或許從左到右)的次第包被。
(2)將抗體按一定的梯度倍比稀釋后按照ELISA從左到右或許從上到下參加。
(3)二抗的稀釋倍數(shù)是一定的，然后顯色，讀值。
ELISA試劑盒OD值的測(cè)守時(shí)，波長(zhǎng)要根據(jù)顯色劑的不一樣而定，通常上我們都運(yùn)用TMB顯色，450nm讀值。根據(jù)讀值得效果可以選定適合的抗原和抗體效價(jià)，這即是棋盤(pán) ELISA試劑盒試驗(yàn)的目的，假設(shè)抗原包被量已知而二抗的工作濃度不確定的話(huà)就用一抗和二抗作棋盤(pán)試驗(yàn)。