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發(fā)布時(shí)間： 2014-04-29 點(diǎn)擊次數(shù)： 1431次目前ELISA法仍在研究當(dāng)中占有著主流地位，ELISA試劑盒的普遍應(yīng)用使得實(shí)驗(yàn)更加方便、經(jīng)濟(jì)和準(zhǔn)確，ELISPOT技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)也決定了它的發(fā)展?jié)摿?。LISPOT法來(lái)源于ELISA，相比較傳統(tǒng)的ELISA法有所突破，是定量ELISA技術(shù)的延伸和發(fā)展。由于游離的循環(huán)抗體或CK的半哀期不同，使之在體液中不斷的被代謝或與靶器官結(jié)合，傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)不能確切的反映體內(nèi)的抗體及CK的水平。80年代，國(guó)外的科研工作者根據(jù)ELISA技術(shù)的基本原理，建立了體外檢測(cè)特異性抗體分泌細(xì)胞和CK分泌細(xì)胞的固相酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)(ELISPOT)。
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到的各種疑問(wèn)：
1，水質(zhì)原因：點(diǎn)復(fù)溶液驗(yàn)證，用娃哈哈礦泉水代替
2，實(shí)驗(yàn)操作原因
吸取到其它相吹干，準(zhǔn)確的取液吹干
離心不*，延長(zhǎng)離心時(shí)間
樣本的污染，更換樣本
乳化未處理*，溫浴（70℃）處理乳化現(xiàn)象
3，儀器試劑原因
離心管未清洗干凈，正確的洗滌器具
有機(jī)溶劑的影響，ELISA試劑盒做試劑空白看影響結(jié)果
4，衍生化試劑原因（長(zhǎng)時(shí)間衍生化試劑變質(zhì)）,更換衍生化試劑
5，與曲線好壞相關(guān),，保證曲線的正常
ELISA試劑盒回收率
1.空白管陽(yáng)性高
樣本本身就是陽(yáng)性樣本，換陰性樣本做回收率
空白管在實(shí)驗(yàn)中被污染，實(shí)驗(yàn)中防止交叉污染
水質(zhì)原因用，娃哈哈礦泉水代替
2.偏 高
添加量不準(zhǔn)確，的添加量
添加濃度不適合，添加合適的濃度
取液吹干量多，準(zhǔn)確的取液吹干
取到其它相層液體，取需用相吹干
復(fù)溶液未稀釋或加入量少，正確的稀釋復(fù)溶液
3.偏 低
添加量不準(zhǔn)確，的添加量
添加濃度不適合，添加合適的濃度
取液吹干量少，準(zhǔn)確的取液吹干
復(fù)溶液稀釋錯(cuò)誤或加入量多，正確的稀釋復(fù)溶液