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發(fā)布時(shí)間： 2014-06-13 點(diǎn)擊次數(shù)： 1465次在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括：
固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。當(dāng)前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀(guān)察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好，吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響，一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀(guān)察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg/ml。
酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是當(dāng)前較為滿(mǎn)意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
目前，國(guó)內(nèi)也有很多酶聯(lián)免疫（ELISA）代測(cè)服務(wù)機(jī)構(gòu)。
●ELISA試劑盒檢驗(yàn)人員需經(jīng)過(guò)培訓(xùn)，熟練掌握本專(zhuān)業(yè)如下幾方面的技術(shù)知識(shí)：
◎檢驗(yàn)項(xiàng)目的基本原理 ELISA試劑盒（ELISA試劑盒原理）;
◎臨床意義;
◎熟悉檢測(cè)技巧，了解易出差錯(cuò)的環(huán)節(jié)及難點(diǎn);
◎熟悉檢測(cè)試劑性能（包括試劑盒組成，包被片段及其組成）;
◎ 熟悉檢測(cè)儀器的原理及性能;掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識(shí)。
◎某些特殊項(xiàng)目的檢測(cè)如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門(mén)組織的專(zhuān)門(mén)培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗。