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ELISA的基本原理
發(fā)布時間： 2017-09-21 點(diǎn)擊次數(shù)： 1788次酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）顧名思義就是以酶作為符號指示物、以抗原抗體免疫反響為基礎(chǔ)的固相吸附測定辦法。因而，一個ELISA測定試劑，其有機(jī)組成部分包含三個方面，即固相支持物及包被的抗原或抗體、酶符號的抗體或抗原和酶反響底物等?？乖蚩贵w的固相化并不影響其免疫結(jié)合活性，酶符號的抗體或抗原亦是如此，而且符號酶的活性不因符號進(jìn)程而損失。整個測定中，抗原抗體結(jié)合反響在固相支持物上進(jìn)行，反響結(jié)果的判斷以酶與其底物效果后的顯色或產(chǎn)生熒光或發(fā)光反響為準(zhǔn)則，顯色或產(chǎn)生熒光或發(fā)光的強(qiáng)度與臨床標(biāo)本中待測物的濃度成正比或反比。目前國內(nèi)的ELISA試劑盒均以酶的顯色反響來完結(jié)測定。
反響體積
此處的反響體積并非是微孔中的液體體積，而是固相免疫測定中與固相包被的抗體或抗原有觸摸的部分，這部分體積到底有多少，很難測定，但比反響管中總液體體積要少得多。固相抗原抗體反響發(fā)生于液體—固相界面，可能處于一級結(jié)合鍵的引力距離內(nèi)，小于10nm。液相中待測抗原或抗體要進(jìn)入到這個結(jié)合界面，需求分散或質(zhì)量搬運(yùn)。微顆粒的反響外表區(qū)域較微孑L要大得多，因而處于抗原抗體結(jié)合界面的體積占總反響體積的比例亦高得多。因而，結(jié)合反響的效率更高。這也是全自動化免疫測定分析儀均選用微顆粒固相的重要原因之一。微孔內(nèi)特異抗體的免疫測定
運(yùn)用吸附的雜亂抗原進(jìn)行微孔內(nèi)特異抗體的免疫測定，與液相測定相比，有明顯的親和力依賴性，固相受體—配體相互效果的穩(wěn)定性好像與微孔內(nèi)特異抗體的免疫測定親和力依賴性和極低比例的所捕獲的總抗體相對立固相上抗原抗體相互效果的免疫化學(xué)
固相上抗原抗體結(jié)合反響所需求的時刻一般，固相免疫測定如ELISA中抗原抗體結(jié)合到達(dá)平衡所需求的時刻，要大于液相免疫測定，并隨液體所占體積與界面抗體或抗原受體所占體積比的添加而添加。當(dāng)在微孑L板孔內(nèi)進(jìn)行免疫測守時，界面反響動力學(xué)顯示其對分散效果有很強(qiáng)的依賴性，分散性越強(qiáng)則反響所需時刻越短，結(jié)合越充沛。這一點(diǎn)可經(jīng)過旋轉(zhuǎn)振動來到達(dá)，微孔的旋轉(zhuǎn)振動可促進(jìn)液體進(jìn)入到可與抗體或抗原包被界面觸摸的較小的區(qū)域內(nèi)。也可在微孔中放一個慵懶的塞子以使反響液體成為一個小體積，或運(yùn)用一個具有大外表的多孔的基質(zhì)如硝酸纖維素，或運(yùn)用微顆粒來做到這一點(diǎn)。
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